WWOX CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403070-ACT

WWOX（WWドメイン含有酸化還元酵素）は、がん抑制に関連するタンパク質をコードする遺伝子で、共通脆弱部位FRA16Dに位置し、ゲノム安定性の維持に関与するとされています。ヒトWWOXは、アポトーシス、DNA損傷応答、細胞ストレス経路を統合するシグナル伝達ネットワークに関与しており、その一部はWWドメインがプロリンに富む相互作用因子と結合することや、転写調節因子を制御することによって媒介されます。WWOXの発現異常や機能喪失は、複数の組織において腫瘍化や転移性表現型と関連づけられており、また遺伝子の破綻は、てんかん性脳症を含む神経発達障害とも関連します。これらの特性から、WWOXは増殖・分化・細胞死を制御する経路における重要なノードとして、頻繁に研究されています。

WWOX CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性WWOXの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WWOX CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における WWOX 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWWOX転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WWOXの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWWOX遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWWOX依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWWOX発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWWOX経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。