WTX CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-409039-ACT-2

ヒトAMER1はWTXタンパク質をコードしており、β-カテニンのターンオーバーを促進し、破壊複合体（destruction complex）の構成要素を協調させることで、カノニカルなWnt/β-カテニンシグナル伝達を制御する腫瘍抑制関連因子である。WTXはさらに、細胞骨格の構築や細胞間接着の過程にも関与し、膜近傍の足場形成と発生プログラムの転写制御とを結び付ける。AMER1の機能喪失型変異はウィルムス腫瘍および頭蓋硬化を伴う骨縞状骨異形成（osteopathia striata with cranial sclerosis）に関与し、またWnt経路の制御異常が異常増殖を駆動する他のがん種でもAMER1の破綻が観察されている。AMER1/WTXに対する遺伝子編集や機能撹乱ツールは、腎臓および骨格のモデル系におけるWnt依存的転写、発生シグナル、ならびに遺伝子型—表現型関係の機序解明研究を支える。

WTX CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AMER1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WTX CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における AMER1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAMER1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WTXの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAMER1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWTX依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAMER1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWTX経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。