Wnt-7a CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401188-ACT

WNT7Aは、分泌型糖タンパク質であるWnt-7aをコードしており、発生過程および成体組織の恒常性維持において、細胞運命の決定、増殖、極性、移動を制御するWntシグナル伝達の主要なリガンドです。Wnt-7aはFrizzled/LRP受容体に結合してβカテニン依存的な転写を活性化するほか、細胞骨格の構築や平面内細胞極性に影響する非カノニカル経路も活性化し得ます。ヒト生物学においてWNT7Aは、四肢のパターニング、上皮—間葉相互作用、組織構築の制御に特に重要であり、Wntシグナルの破綻は先天奇形やがん化過程に広く関与するとされています。そのため、WNT7A発現を操作することは、経路間クロストークや、Wntリガンドによって制御される状況依存的な転写プログラムを解析するうえで有用です。

Wnt-7a CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性WNT7Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Wnt-7a CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における WNT7A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWNT7A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Wnt-7aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWNT7A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWnt-7a依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWNT7A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWnt-7a経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。