Plasmide CRISPR d'Activation (h) Wnt-7a: sc-401188-ACT

WNT7A code la glycoprotéine sécrétée Wnt-7a, un ligand clé de la signalisation Wnt qui régule, au cours du développement et du maintien de l’homéostasie des tissus adultes, la spécification du destin cellulaire, la prolifération, la polarité et la migration. Wnt-7a peut se lier aux récepteurs Frizzled/LRP pour activer une transcription dépendante de la β-caténine, ainsi que des voies non canoniques qui influencent l’organisation du cytosquelette et la polarité planaire des cellules. En biologie humaine, WNT7A est particulièrement impliqué dans la mise en place du patron des membres, les interactions épithélio-mésenchymateuses et la régulation de l’architecture tissulaire, la dérégulation de la signalisation Wnt étant largement associée aux malformations congénitales et aux processus oncogéniques. Moduler l’expression de WNT7A est donc utile pour analyser les interactions entre voies de signalisation et les programmes transcriptionnels dépendants du contexte contrôlés par les ligands Wnt.

Wnt-7a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WNT7A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Wnt-7a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WNT7A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WNT7A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Wnt-7a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WNT7A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Wnt-7a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Wnt-7a dans les cellules tumorales présentant une expression de WNT7A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.