Wnt-5a Double Nickaseプラスミド (m): sc-423718-NIC

マウスWnt5aは、分泌性糖タンパク質Wnt-5aをコードしており、細胞極性、指向性移動、組織形態形成を制御する非カノニカルWntシグナル伝達における主要なリガンドです。Wnt-5aは主にFrizzled受容体およびROR受容体を介してシグナルを伝え、平面内細胞極性（PCP）経路やWnt/Ca2+経路を活性化し、JNK、PKC、小型GTPアーゼなどの下流エフェクターを調節します。さらにβカテニン依存性シグナルとのクロストークを通じて、Wnt-5aは多様な細胞種における分化プログラム、細胞骨格ダイナミクス、炎症性シグナル伝達にも影響を与えます。Wnt5a活性の異常は、発生異常、線維化や創傷修復応答、ならびに腫瘍細胞の浸潤・転移における文脈依存的な役割と関連づけられています。

Wnt-5a ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Wnt5a 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Wnt5a内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Wnt5aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Wnt5aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。