Wnt-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401936

Panoramica

WNT3 codifica la glicoproteina secreta Wnt-3, un ligando canonico della via Wnt che attiva i recettori Frizzled/LRP per stabilizzare la β-catenina e modulare la trascrizione dipendente da TCF/LEF. Questa segnalazione controlla il patterning embrionale, il mantenimento delle cellule staminali e progenitrici e la regolazione dei programmi di proliferazione e differenziamento in molteplici tessuti. Un’attività aberrante di WNT3/Wnt-3 altera l’output della rete Wnt/β-catenina e interagisce con vie che governano le dinamiche epitelio–mesenchima, la specificazione del destino cellulare e l’omeostasi tissutale. La disregolazione della segnalazione associata a Wnt-3 è stata implicata in anomalie dello sviluppo e in stati trascrizionali rilevanti per la patologia, rendendola un utile bersaglio per studi meccanicistici delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WNT3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WNT3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WNT3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Wnt-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WNT3 per lo studio della segnalazione di Wnt-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni WNT3 critici per la funzione di Wnt-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WNT3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Wnt-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Wnt-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WNT3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Wnt-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Wnt-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WNT3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WNT3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.