Wnt-11 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423711

Panoramica

Wnt11 codifica il ligando secreto Wnt-11, un modulatore chiave della segnalazione Wnt non canonica che, durante lo sviluppo, determina la polarità cellulare, la migrazione direzionale e la morfogenesi dei tessuti. Wnt-11 segnala comunemente attraverso le vie della polarità planare delle cellule e Wnt/Ca²⁺, coinvolgendo recettori quali Frizzled e ROR per influenzare la dinamica del citoscheletro e programmi trascrizionali dipendenti dal calcio. Nei modelli murini, l’attività di Wnt-11 è collegata a processi di organogenesi, inclusi il patterning cardiaco e craniofacciale, e può interagire con la segnalazione dipendente da β-catenina in modo specifico per contesto. Una deregolazione della segnalazione di Wnt11 è stata associata a morfogenesi anomala, a programmi di motilità cellulare alterati e a fenotipi rilevanti in modelli di fibrosi e di biologia del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-11 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Wnt11 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Wnt11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Wnt11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Wnt-11.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Wnt11 per lo studio della segnalazione di Wnt-11, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Wnt11 critici per la funzione di Wnt-11
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Wnt11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Wnt-11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Wnt-11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Wnt11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Wnt-11 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Wnt-11 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Wnt11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Wnt11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.