Wnt-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400982-ACT

O WNT1 humano codifica a glicoproteína secretada Wnt-1, um ligante canónico da via Wnt que inicia a sinalização pelos recetores Frizzled/LRP para estabilizar a β-catenina e regular a transcrição dependente de TCF/LEF. Esta via controla a especificação do destino celular, a proliferação e a diferenciação durante a embriogénese e a homeostase dos tecidos, com efeitos a jusante na manutenção de células estaminais e no padrão morfogenético. A sinalização desregulada de WNT1 e perturbações mais amplas na rede Wnt/β-catenina estão associadas a distúrbios do desenvolvimento e a processos oncogénicos, através de programas transcricionais alterados, dinâmicas epitélio–mesênquima e controlo do ciclo celular dependente do contexto. Assim, o WNT1 é amplamente utilizado para investigar a ativação da via Wnt induzida por ligantes, a regulação por feedback e a comunicação cruzada com os eixos de sinalização MAPK, PI3K/AKT e BMP em modelos celulares humanos.

Wnt-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-1 em células tumorais com expressão de WNT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.