WNK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403420-ACT

WNK1 (quinase 1 “with-no-lysine [K]”) codifica uma quinase de serina/treonina que atua como reguladora a montante do transporte de íons e da homeostase do volume celular, modulando cotransportadores cátion-cloreto por meio do eixo de sinalização WNK–SPAK/OSR1. Ela integra sinais de estresse osmótico para coordenar o manejo de NaCl, a dinâmica do citoesqueleto e o tráfego vesicular, influenciando o transporte epitelial e a excitabilidade neuronal. A WNK1 também se conecta a saídas de sinalização relacionadas a MAPK e PI3K que afetam proliferação e migração de maneira dependente do contexto. A desregulação genética ou de sinalização de WNK1 tem sido associada a fenótipos de pressão arterial e a processos relacionados à neuropatia, tornando-a um nó relevante para estudos mecanísticos do equilíbrio eletrolítico e da sinalização de resposta ao estresse.

WNK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WNK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WNK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WNK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WNK1 em células tumorais com expressão de WNK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.