WIF-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402389-ACT

WIF1 codifica o fator inibitório de Wnt 1 (WIF-1), um antagonista extracelular secretado que se liga a ligantes WNT e limita a interação com os receptores, atenuando assim programas transcricionais canônicos dependentes de β-catenina/TCF e saídas relacionadas da sinalização Wnt não canônica. Ao restringir o controle, mediado por Wnt, da proliferação, diferenciação e padronização tecidual, o WIF-1 contribui para a regulação do comportamento de células-tronco/progenitoras e de gradientes de sinalização extracelular. A redução da expressão de WIF1 está frequentemente associada a atividade aberrante da via Wnt e a alterações de características epiteliais–mesenquimais em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo transformação oncogênica e remodelamento fibrótico. Como modulador da disponibilidade de ligantes, o WIF-1 é comumente estudado em interações (cross-talk) de vias com redes de sinalização Hedgehog, TGF-β e inflamatórias, que convergem para o destino celular e a homeostase da matriz.

WIF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WIF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WIF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WIF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WIF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WIF-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WIF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WIF-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WIF-1 em células tumorais com expressão de WIF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.