WBSCR16 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413429-ACT

RCC1L (WBSCR16) codifica uma proteína mitocondrial do tipo RCC1, implicada na coordenação da biogénese do ribossoma mitocondrial e no suporte da capacidade de fosforilação oxidativa. Por meio de efeitos na montagem do mitorribossoma e no metabolismo do RNA mitocondrial, a WBSCR16 ajuda a manter a proteostase mitocondrial e o funcionamento eficiente da cadeia de transporte de eletrões. A perturbação desta via pode alterar a homeostase energética celular, as respostas ao stress mitocondrial e a sinalização a jusante associada à adaptação metabólica. A WBSCR16 tem sido estudada no contexto de fenótipos de disfunção mitocondrial e é relevante para investigação mecanística de perturbações que envolvem tradução e respiração mitocondriais comprometidas.

WBSCR16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RCC1L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WBSCR16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RCC1L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RCC1L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WBSCR16. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RCC1L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WBSCR16 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WBSCR16 em células tumorais com expressão de RCC1L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.