WBP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409856-ACT

WBP2（WWドメイン結合タンパク質2）は、WWドメインを有するパートナーと結合して機能するアダプター／転写共役調節因子として働き、シグナル入力を遺伝子発現プログラムへ統合します。受容体シグナルおよび核内シグナルに関連する経路に関与し、共活性化因子複合体との相互作用を介した転写制御や、増殖・分化に関連する転写出力の調節を担います。WBP2の活性は、がん生物学におけるシグナル状態の変化という文脈で研究されており、共役調節ネットワークの変動が細胞増殖や遊走表現型に影響し得ることが示されています。これらの特性により、WBP2はヒト細胞における転写回路、シグナル依存的な遺伝子制御、ならびに状況依存的な経路再編成を解析するうえで有用な結節点となります。

WBP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性WBP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WBP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における WBP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWBP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WBP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWBP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWBP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWBP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWBP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。