VPS26B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410249-ACT

VPS26Bは、エンドソームからトランスゴルジネットワークおよび細胞膜へのカーゴの選別とリサイクリングを制御するレトロマー複合体の中核構成要素をコードしています。VPS35およびVPS29との協調を通じて、VPS26Bは膜タンパク質の恒常性維持に寄与し、受容体輸送を調節するとともに、異常なエンドソーム成熟を抑制することでリソソーム機能を支えます。レトロマー依存性経路は、細胞シグナル伝達、栄養トランスポーターの局在、細胞内プロテオスタシスに影響し、VPS26Bの働きをオートファジーやエンドリソソーム・ストレス応答などのより広範な過程と結び付けています。エンドソーム輸送およびレトロマー機能の破綻は神経変性や発生異常の表現型に関与するとされており、VPS26Bは膜輸送関連疾患の病態生物学を機序レベルで検討するうえで重要な研究対象です。

VPS26B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VPS26Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VPS26B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VPS26B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVPS26B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VPS26Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVPS26B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVPS26B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVPS26B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVPS26B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。