VPS13A Double Nickaseプラスミド (h): sc-407168-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- VPS13A Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- VPS13Aダブルニカースプラスミド（h）およびVPS13Aダブルニカースプラスミド（h2）は、VPS13Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
VPS13A Double Nickaseプラスミド (h) | sc-407168-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VPS13A Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-407168-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VPS13Aは、オルガネラ間の接触部位に局在し、脂質輸送および膜の恒常性維持を担う大型の周辺膜タンパク質をコードします。エンドソーム輸送、オートファジー、ミトコンドリア機能における役割が確立されています。ニューロンをはじめとする代謝活性の高い細胞では、VPS13Aは脂質交換と膜リモデリングを協調させることで、オルガネラ形態や細胞内分布の維持に寄与します。VPS13Aの破綻は細胞ストレス応答や小胞動態を乱し、膜接触部位の生物学やオルガネラ品質管理経路を研究する上で重要なハブとなります。機能喪失型バリアントは神経変性表現型と関連しており、ヒト細胞モデルを用いた機序解析に疾患関連の枠組みを提供します。
VPS13A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における VPS13A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、VPS13A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、VPS13Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、VPS13Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。