Vitamin D Receptor/VDR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400171-ACT

VDRはビタミンD受容体をコードする遺伝子であり、リガンド依存的に活性化される核内受容体型の転写因子です。RXRとヘテロ二量体を形成してビタミンD応答配列に結合し、カルシウムおよびリン酸の恒常性を制御する遺伝子プログラムを協調的に調節します。ミネラル代謝にとどまらず、VDRはMAPK、NF-κB、サイトカイン応答性の転写ネットワークをまたぐシグナルを統合することで、上皮分化、免疫調節、バリア機能の維持にも関与します。VDRの活性や発現の変化は、炎症性および自己免疫性の表現型、細胞周期制御の破綻、ならびに状況依存的な腫瘍関連転写状態の変化と関連づけられています。これらの機能により、VDRは多様なヒト細胞種におけるステロイドホルモン受容体生物学および遺伝子制御を研究する上での中核的なノードとなっています。

Vitamin D Receptor/VDR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VDRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Vitamin D Receptor/VDR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VDR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVDR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Vitamin D Receptor/VDRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVDR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVitamin D Receptor/VDR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVDR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVitamin D Receptor/VDR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。