VHR Double Nickaseプラスミド (h): sc-405733-NIC

二重特異性ホスファターゼ3（DUSP3）は、ワクシニアH1関連ホスファターゼ（VHR）とも呼ばれ、細胞質に局在する二重特異性ホスファターゼである。MAPK上のホスホチロシン残基およびホスホセリン／スレオニン残基を脱リン酸化し、ERKおよびJNKファミリー分子に対する活性が報告されている。MAPKシグナル伝達の強度と持続時間を調節することで、VHRは細胞周期進行、ストレス応答シグナル、ならびに増殖因子やサイトカイン入力の下流にある転写プログラムの制御に寄与する。DUSP3はまた、キナーゼのリン酸化状態および下流遺伝子発現への影響を介して、免疫シグナルや細胞増殖の調節にも関与するとされる。DUSP3／VHRの発現量や活性の変化は、がん関連シグナルや血液腫瘍・固形腫瘍の生物学的文脈で報告されており、疾患関連モデルにおける経路再配線の機構解明研究を促している。

VHR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DUSP3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DUSP3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DUSP3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DUSP3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。