VGLUT2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403888-ACT

SLC17A6は、小胞型グルタミン酸トランスポーター2（VGLUT2）をコードしており、興奮性神経伝達を支えるためにシナプス前終末の小胞へグルタミン酸を取り込むシナプス小胞膜タンパク質です。小胞内グルタミン酸量と量子的放出を制御することで、VGLUT2はシナプス強度、回路形成、ならびに中枢および末梢ニューロンにおける活動依存的可塑性の形成に寄与します。VGLUT2の機能は、小胞輸送、V-ATPaseが形成するプロトンの電気化学勾配、そして神経細胞の興奮性やネットワーク同期を制御するグルタミン酸作動性シグナル伝達経路と交差しています。グルタミン酸の取り扱いの変化や興奮性／抑制性バランスの破綻は、SLC17A6によって制御されるプロセスが神経発達および神経精神疾患様の表現型、さらに興奮毒性ストレスに関連する機序に関与することを示唆します。

VGLUT2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC17A6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VGLUT2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC17A6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC17A6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VGLUT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC17A6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVGLUT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC17A6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVGLUT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。