VGF CRISPR Activationプラスミド (m): sc-436316-ACT

Vgf は、神経内分泌系の分泌顆粒タンパク質 VGF をコードしており、VGF はタンパク質分解によって処理され、神経細胞の興奮性、シナプス可塑性、ならびに神経内分泌性の情報伝達に影響を与える生理活性ペプチドへと変換されます。マウス組織では、VGF の発現は栄養因子などのトロフィックシグナルや活動依存的な転写プログラムによって誘導され、エネルギーバランス、ストレス応答、神経新生を制御する経路と結び付けられています。VGF 由来ペプチドは、ニューロペプチドのシグナル伝達ネットワークとの相互作用、および下流の cAMP/PKA 系や MAPK 関連プロセスを介して、神経伝達物質放出と代謝恒常性を調節します。Vgf 発現の異常は、実験モデルにおいて、気分・認知に関連する表現型の変化、代謝機能障害、さらに神経変性疾患や神経精神疾患に関連するより広範な状態と関連付けられています。

VGF CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Vgfの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VGF CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Vgf 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVgf転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VGFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVgf遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVGF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVgf発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVGF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。