versican Double Nickaseプラスミド (h): sc-401173-NIC

ヒトVCANは、細胞外マトリックスの大型コンドロイチン硫酸プロテオグリカンであるバーシカン（versican）をコードしており、ヒアルロン酸、インテグリン、ならびに増殖因子シグナル伝達との相互作用を介して、細胞周囲の構造（ペリセルラー・アーキテクチャ）を形成し、細胞接着、遊走、増殖を調節する。バーシカンは組織形態形成や創傷修復に寄与し、間質および血管の微小環境におけるメカノトランスダクション（機械刺激のシグナル変換）や炎症性細胞のトラフィッキングも制御する。VCANの発現変化やアイソフォームのバランス異常は、線維化、動脈硬化、腫瘍関連ストローマに関与する細胞外マトリックス再構築プログラムと関連づけられており、そこで浸潤や免疫細胞浸潤に影響を及ぼし得る。これらの特性により、VCANは、マトリックス駆動性シグナル伝達、上皮‐間葉ダイナミクス、そしてヒトモデル系における細胞‐マトリックス相互作用（クロストーク）を研究するための有用な標的となる。

versican ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における VCAN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、VCAN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、VCANの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、VCANが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。