VEGF-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400553-ACT

VEGFC codifica o fator de crescimento endotelial vascular C (VEGF-C), um ligante secretado que sinaliza principalmente por meio do VEGFR-3 (FLT4) e, após processamento proteolítico, também pode interagir com o VEGFR-2 (KDR). O VEGF-C ativa PI3K–AKT, MAPK/ERK e vias relacionadas de sinalização por receptores tirosina-quinase para regular a linfangiogênese, a migração de células endoteliais e a permeabilidade vascular. Esses processos são centrais para a homeostase dos fluidos teciduais e o tráfego de células imunes dentro de redes linfáticas. A expressão ou sinalização desregulada de VEGFC é frequentemente investigada em contextos de remodelamento linfático associado a tumores, inflamação e fisiopatologia relacionada a edema.

VEGF-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VEGFC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VEGF-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VEGFC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VEGFC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VEGF-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VEGFC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VEGF-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VEGF-C em células tumorais com expressão de VEGFC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.