VEGF-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423666

Panoramica

Vegfb codifica il fattore di crescita endoteliale vascolare B (VEGF-B), un ligando secreto della famiglia VEGF che segnala principalmente attraverso VEGFR1 (FLT1) e le neuropiline per modulare il comportamento delle cellule endoteliali e l’omeostasi vascolare. A differenza del fortemente angiogenico VEGF-A, VEGF-B è spesso associato alla sopravvivenza endoteliale, alla stabilizzazione dei vasi e alla regolazione dell’assorbimento e del metabolismo dei lipidi nei tessuti con elevata richiesta ossidativa. La segnalazione dipendente da VEGF-B interseca le vie PI3K–AKT e MAPK e può influenzare la funzione mitocondriale e i programmi di trasporto degli acidi grassi. Alterazioni dell’attività di VEGF-B sono state studiate in contesti di stress metabolico e di biologia cardiovascolare, inclusi la disfunzione vascolare e la suscettibilità dei tessuti al danno ischemico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VEGF-B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vegfb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vegfb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vegfb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VEGF-B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vegfb per lo studio della segnalazione di VEGF-B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vegfb critici per la funzione di VEGF-B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vegfb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VEGF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VEGF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vegfb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VEGF-B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VEGF-B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vegfb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vegfb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.