VDAC3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404240-ACT

VDAC3 (proteína de canal aniônico seletivo dependente de voltagem 3) é uma porina da membrana externa mitocondrial que contribui para a troca de metabólitos e íons entre o citosol e as mitocôndrias, influenciando a fosforilação oxidativa e a bioenergética celular. Como parte da família dos canais aniônicos dependentes de voltagem, participa da regulação da permeabilidade da membrana mitocondrial, do equilíbrio redox e da comunicação com vias de sinalização apoptótica. A VDAC3 tem sido associada a processos de controle de qualidade mitocondrial e a respostas ao estresse oxidativo, com relevância particular em tecidos com alta demanda energética. O transporte e a sinalização mitocondriais desregulados envolvendo a VDAC3 são de interesse em estudos sobre neurodegeneração, disfunção cardiometabólica, infertilidade e remodelamento metabólico associado ao câncer.

VDAC3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VDAC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VDAC3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VDAC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VDAC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VDAC3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VDAC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VDAC3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VDAC3 em células tumorais com expressão de VDAC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.