VDAC1/Porin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-418200-ACT-2

O VDAC1 humano (canal aniônico seletivo dependente de voltagem 1), também conhecido como porina, é um canal da membrana externa mitocondrial que regula a troca de ATP/ADP, metabólitos e íons entre as mitocôndrias e o citosol, coordenando assim a bioenergética celular e a homeostase redox. Ele interage com a hexoquinase e com proteínas da família BCL-2 para modular a permeabilidade mitocondrial, o manejo de cálcio em sítios de contato mitocôndria–retículo endoplasmático (RE) e processos relacionados à apoptose, conectando a dinâmica mitocondrial à sinalização de estresse. A expressão desregulada do VDAC1 ou a atividade do canal tem sido associada à reprogramação metabólica alterada e à disfunção mitocondrial observadas em contextos de câncer, doenças neurodegenerativas e doenças cardiovasculares. A edição gênica direcionada ao VDAC1 é comumente utilizada para dissecar mecanismos de transporte mitocondrial, mapear redes de interação proteína–proteína na membrana externa mitocondrial e estabelecer papéis causais do VDAC1 na suscetibilidade à morte celular e na adaptação de vias metabólicas.

VDAC1/Porin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VDAC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VDAC1/Porin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VDAC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VDAC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VDAC1/Porin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VDAC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VDAC1/Porin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VDAC1/Porin em células tumorais com expressão de VDAC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.