Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Vav Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423655
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Vav Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Vav, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Vav Antibody (D-7): sc-8039
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Vav Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423655 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Vav1 codifica Vav, un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina specifico delle cellule ematopoietiche, che attiva le GTPasi della famiglia Rho come Rac1 e Cdc42 per coordinare il rimodellamento del citoscheletro e la propagazione del segnale. Nelle cellule immunitarie murine, Vav1 integra la segnalazione a valle dei recettori dell’antigene e dei recettori Fc, collegando le vie delle tirosin-chinasi a programmi trascrizionali dipendenti da MAPK, NF-κB e dal calcio. Queste attività modellano lo sviluppo, l’attivazione e la migrazione delle cellule T e influenzano le funzioni effettrici guidate dall’antigene nelle diverse linee linfoidi. Una segnalazione deregolata di Vav1 è stata associata a disfunzioni immunitarie e a contesti di segnalazione oncogenica in modelli di malattie ematologiche, rendendolo un nodo chiave per studi meccanicistici delle reti di segnalazione dei leucociti.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Vav (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vav1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vav1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vav1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Vav.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vav1 per lo studio della segnalazione di Vav, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Vav1 critici per la funzione di Vav
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vav1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Vav CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Vav CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vav1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Vav Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Vav (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vav1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vav1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.