Vav Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400606-ACT

O VAV1 humano codifica a Vav, um fator de troca de nucleotídeos de guanina específico de células hematopoéticas que ativa GTPases da família Rho, como a RAC1, para coordenar a remodelação do citoesqueleto de actina, a adesão celular e a migração. A Vav atua a jusante da sinalização de imunorreceptores e integrinas, conectando eventos de fosforilação dependentes de tirosina quinases a vias que incluem a sinalização do receptor de células T, a ativação de NF-κB/MAPK e a formação da sinapse imune. A desregulação da sinalização de VAV1 está associada a alterações no desenvolvimento de linfócitos e a ativação imune aberrante, tendo sido implicada em neoplasias hematológicas e distúrbios relacionados ao sistema imunológico. Como um hub de sinalização, o VAV1 é amplamente estudado por seus papéis nos limiares de ativação de linfócitos, na produção de citocinas e no tráfego dependente do citoesqueleto.

Vav O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VAV1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Vav O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VAV1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VAV1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Vav. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VAV1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Vav no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Vav em células tumorais com expressão de VAV1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.