V-ATPase C1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402679-NIC

ATP6V1C1 codifica la subunità C1 della H+-ATPasi vacuolare (V-ATPasi) umana, nel dominio V1, un componente centrale del settore citosolico deputato all’idrolisi dell’ATP che alimenta la traslocazione di protoni attraverso le membrane endomembranose e la membrana plasmatica. L’acidificazione mediata dalla V-ATPasi è essenziale per la maturazione endosoma–lisosoma, l’endocitosi mediata da recettore, il flusso autofagico e il traffico vescicolare, e supporta la processazione pH-dipendente delle macromolecole all’interno delle vie secretorie e degradative. Attraverso la regolazione del pH degli organelli e l’accoppiamento con reti di sensing dei nutrienti come mTORC1 a livello del lisosoma, l’attività della V-ATPasi influenza il metabolismo cellulare, le risposte allo stress e il turnover delle proteine di membrana. La deregolazione della funzione della V-ATPasi e l’alterata omeostasi del pH compartimentale sono state associate a fenotipi rilevanti per la neurodegenerazione, l’invasione delle cellule tumorali/il potenziale metastatico e difetti nella processazione dell’antigene e nella segnalazione immunitaria, rendendo ATP6V1C1 un bersaglio utile per studi meccanicistici della biologia dipendente dall’acidificazione.

V-ATPase C1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP6V1C1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP6V1C1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP6V1C1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP6V1C1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.