UXT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403823-ACT

ヒトUXT（ubiquitously expressed transcript）は、小型で主に核内に局在するタンパク質をコードしており、転写の共調節因子として、また多タンパク質複合体の足場（スキャフォールド）として機能します。UXTは、転写因子やクロマチン関連機構との相互作用を介して、NF-κB依存的な遺伝子発現およびその他のシグナル伝達プログラムの制御に関与するとされ、細胞周期進行、アポトーシス、炎症応答の調節と関連づけられています。転写出力やタンパク質複合体の安定性を形作ることで、UXTは細胞の恒常性維持に寄与し、がんや免疫関連疾患の文脈で観察されるシグナル状態の変化とも関連があることが報告されています。これらの特徴により、UXTは転写制御とストレス応答性シグナル伝達の間の経路クロストークを研究するうえで有用なノードとなります。

UXT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UXTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UXT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UXT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUXT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UXTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUXT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUXT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUXT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUXT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。