USP9X Double Nickaseプラスミド (h): sc-402285-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- USP9X Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- USP9Xダブルニカースプラスミド（h）およびUSP9Xダブルニカースプラスミド（h2）は、USP9Xを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
USP9X Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402285-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
USP9X Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402285-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
USP9Xは、タンパク質基質からユビキチンを除去する大型のユビキチン特異的プロテアーゼをコードしており、基質タンパク質の安定性、局在、シグナル伝達の出力を調節します。USP9Xはユビキチン依存的なプロテオスタシスに関与し、細胞運命決定、細胞周期の進行、DNA損傷応答、ストレスシグナル伝達を制御する経路と交差しており、キナーゼ系やアポトーシス関連ネットワークの調節にも関わります。脱ユビキチン化活性を介して、USP9Xはエンドサイトーシス輸送や主要な制御因子のタンパク質ターンオーバーに影響し、その結果として転写プログラムと細胞恒常性を形成します。USP9Xの発現や活性の破綻は、神経発達障害や複数のがんで観察されるシグナル状態の変化と関連づけられており、ユビキチン経路の生物学的機構を解明する研究で頻繁に対象となっています。
USP9X ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における USP9X 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、USP9X内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、USP9Xの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、USP9Xが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。