USP9X Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402285

Panoramica

USP9X codifica una proteasi specifica per l’ubiquitina che regola la stabilità proteica rimuovendo catene di ubiquitina da substrati chiave, modulando la proteostasi e l’intensità dei segnali. È stata collegata al controllo della sopravvivenza cellulare e delle risposte allo stress tramite la modulazione di vie come la segnalazione NF-κB, le reti di risposta al danno al DNA e i processi associati al traffico di membrana. Influenzando il turnover di proteine regolatorie e di componenti del sistema ubiquitina–proteasoma, USP9X incide sulla progressione del ciclo cellulare, sull’apoptosi e sui programmi di differenziamento. Un’attività o un’espressione deregolata di USP9X è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi della segnalazione in diversi contesti rilevanti per la malattia, tra cui l’oncologia e fenotipi del neurosviluppo, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO USP9X (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene USP9X in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del USP9X insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto USP9X a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina USP9X.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di USP9X per lo studio della segnalazione di USP9X, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni USP9X critici per la funzione di USP9X
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di USP9X per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal USP9X CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal USP9X CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus USP9X. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal USP9X Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR USP9X (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia USP9X per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio USP9X definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.