USP17L2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417603-ACT

USP17L2（ubiquitin specific peptidase 17 like family member 2）はヒトの脱ユビキチン化酵素で、標的基質からユビキチンを除去することでタンパク質の安定性やシグナル伝達のダイナミクスを調節することに関与しています。ユビキチン–プロテアソーム系の一部として、USP17ファミリーのメンバーは細胞周期進行の制御、受容体およびキナーゼのシグナル伝達、さらにユビキチン依存性経路の微調整を介した自然免疫・炎症応答の調節と関連づけられています。脱ユビキチン化の変化はMAPK/ERKやNF-κB関連プログラムを再編し、増殖、ストレス応答、転写出力に影響を及ぼし得ます。USP17パラログを含むユビキチンシグナル伝達ネットワークの破綻は、状況依存的に異常な細胞内シグナル伝達に寄与しうる要因として、がん生物学や免疫関連疾患の機序研究でしばしば検討されています。

USP17L2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性USP17L2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

USP17L2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における USP17L2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUSP17L2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性USP17L2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUSP17L2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUSP17L2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUSP17L2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUSP17L2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。