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URE-B1慢病毒激活颗粒(h) | sc-404890-LAC | 200 µl | $455.00 |
HUWE1 编码 URE-B1,这是一种含 HECT 结构域的 E3 泛素连接酶,可通过催化依赖泛素的降解过程来调控蛋白质稳态,从而介导多种信号因子及 DNA 损伤应答因子的周转。通过对泛素化的调控,HUWE1 影响细胞凋亡、细胞周期进程与基因组稳定性,并与 p53 信号通路及应激响应型转录程序等相关路径相整合。HUWE1 活性或表达失调已在多种疾病背景中与增殖异常及 DNA 修复缺陷相关,因此它是研究泛素介导的信号传导与转录稳态的重要枢纽。其广泛的底物网络也支持对“泛素动态如何塑造细胞命运决策”这一机制问题的深入探索。
URE-B1 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 HUWE1 表达。
URE-B1 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在HUWE1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性URE-B1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 HUWE1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。