UPase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411050-ACT

ヒトのUPP1はウリジンホスホリラーゼ（UPase）をコードしており、ピリミジンヌクレオシド代謝における重要な酵素として、ウリジンおよびデオキシウリジンの可逆的なリン酸分解を触媒し、ウラシルとリボース-1-リン酸、またはデオキシリボース-1-リン酸を生成します。ヌクレオシドのサルベージと細胞内ピリミジンプールのバランスを調節することで、UPaseはヌクレオチド恒常性、RNA/DNA前駆体の利用可能性、ならびに栄養ストレス下での代謝適応に影響を与えます。UPP1の活性は、リボースリン酸のフラックスを介して中央炭素代謝へと流入することにより、ミトコンドリア機能や酸化還元バランスを支える経路とも交差します。実験モデルでは、UPP1の発現変化が腫瘍代謝、増殖表現型、そしてフルオロピリミジン代謝に対する感受性と関連づけられており、疾患関連の文脈でヌクレオチド回転（ターンオーバー）を研究するうえで有用な結節点となります。

UPase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UPP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UPase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UPP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUPP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UPaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUPP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUPase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUPP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUPase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。