uPAR Double Nickaseプラスミド (h): sc-400666-NIC

ヒトのPLAURは、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーター受容体（uPAR）をコードしている。uPARはGPIアンカー型の細胞表面受容体で、uPAの活性を局所に集積させることでプラスミン産生と細胞周囲でのタンパク質分解（ペリセルラー・プロテオリシス）を促進する。uPARはビトロネクチンや、インテグリンおよびFPRファミリーなどの共受容体との相互作用を介して、細胞外マトリックスのリモデリング、細胞接着、遊走、浸潤に関わるシグナル伝達を統合し、プロテアーゼ活性を細胞骨格ダイナミクスやMAPK/PI3K関連経路に結び付ける。PLAUR/uPARの発現異常は、炎症に伴う組織リモデリングや腫瘍微小環境の生物学と関連づけられており、タンパク質分解と細胞運動性の変化が疾患関連の表現型に寄与する。細胞表面における結節的な制御因子として、uPARは転移性播種、血管新生、免疫細胞トラフィッキングの機構研究で頻繁に取り上げられている。

uPAR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PLAUR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PLAUR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PLAURの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PLAURが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。