UNKL Double Nickaseプラスミド (h): sc-413020-NIC

UNKLは、細胞内の構造化や膜関連プロセスに関与すると考えられているものの、機能解析が十分に進んでいないヒトタンパク質をコードします。近年、ユビキチン依存的なタンパク質安定性および輸送（トラフィッキング）の制御との関連が示唆されています。予測されるドメイン構造と限られた機能報告に基づくと、UNKLは特定の標的（クライアント）タンパク質の分解速度や局在を調節することで、プロテオスタシスやシグナル伝達の出力に影響を与える可能性があります。これらの経路の制御が変化すると、細胞状態の遷移、ストレス応答、増殖制御に影響し得るため、UNKLは経路ネットワークの配線をシステムレベルで理解する研究において注目される標的となっています。発現データや遺伝学的関連データセットからは、タンパク質恒常性やシグナル伝達の破綻が細胞機能不全に関与する状況を含め、疾患生物学との関連の可能性も示されています。

UNKL ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における UNKL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、UNKL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、UNKLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、UNKLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。