ULK1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-423606-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ULK1O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ULK1 (m) e o Plasmídeo Double Nickase ULK1 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Ulk1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ULK1 Anticorpo (F-4): sc-390904
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ULK1 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-423606-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ULK1 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-423606-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene **Ulk1** de camundongo codifica a **ULK1**, uma quinase de serina/treonina que atua como iniciadora central da **macroautofagia**, integrando sinais do estado nutricional e energético. A ULK1 forma um complexo de iniciação com **ATG13**, **FIP200/RB1CC1** e **ATG101**, e é regulada por **AMPK** e **mTORC1** para controlar a biogênese de **autofagossomos** durante a privação de nutrientes e o estresse celular. Por meio da fosforilação de fatores de autofagia a jusante, a ULK1 coordena o recrutamento de membranas e a sinalização autofágica inicial, influenciando a **proteostase**, o controle de qualidade mitocondrial e respostas da imunidade inata. A desregulação da autofagia dependente de ULK1 tem sido associada à neurodegeneração, à biologia de infecções, à disfunção metabólica e à adaptação ao estresse em câncer, o que torna **Ulk1** um alvo frequente em estudos de dissecção de vias.
ULK1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Ulk1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Ulk1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Ulk1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Ulk1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.