UHRF1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-421937-NIC

Uhrf1 codifica a UHRF1, um regulador epigenético multidomínios que acopla o reconhecimento de DNA CpG hemimetilado ao recrutamento da maquinaria de manutenção da metilação do DNA durante a fase S. Por meio dos seus domínios SRA, PHD e RING, a UHRF1 coordena a herança da metilação do DNA, a comunicação cruzada entre modificações de histonas e a remodelação da cromatina para preservar a estabilidade do genoma e os programas de transcrição. Em células de camundongo, a atividade da UHRF1 está estreitamente ligada à progressão do ciclo celular, à montagem de cromatina acoplada à replicação e à repressão de elementos transponíveis, com efeitos a jusante sobre a diferenciação e o comprometimento de linhagem. A manutenção epigenética associada à UHRF1 quando desregulada é amplamente relevante para a transformação oncogênica, a proliferação aberrante e a instabilidade do epigenoma, tornando Uhrf1 um nó-chave para estudos mecanísticos da regulação gênica dirigida por metilação.

UHRF1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Uhrf1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Uhrf1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Uhrf1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Uhrf1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.