UGT1A1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401190-LAC

UGT1A1 codifica a UDP-glicuronosiltransferase 1A1, uma enzima microssomal de desintoxicação de fase II que catalisa a glicuronidação da bilirrubina e de diversos substratos endógenos e xenobióticos no retículo endoplasmático. Ao converter compostos lipofílicos em glicuronídeos mais hidrossolúveis, a UGT1A1 favorece a depuração hepática e atua em coordenação com vias mais amplas de metabolismo de fármacos, incluindo a biotransformação ligada ao citocromo P450 e o efluxo mediado por transportadores. A variação na expressão ou na atividade de UGT1A1 é um determinante fundamental da homeostase da bilirrubina e das diferenças interindividuais no metabolismo de medicamentos e de substâncias químicas ambientais, com grande relevância para a farmacogenômica e para a pesquisa em função hepática. A desregulação da capacidade de glicuronidação também é estudada no contexto de estresse metabólico e dos mecanismos de doenças hepatobiliares.

As Partículas de Ativação Lentivirais UGT1A1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de UGT1A1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais UGT1A1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição UGT1A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de UGT1A1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo UGT1A1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.