UGT1A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417594-ACT

UGT1A8はUGT1Aファミリーに属するヒトUDP-グルクロン酸転移酵素をコードしており、多様な外来性化合物（キセノバイオティクス）および内因性代謝物に対する第II相反応のグルクロン酸抱合を触媒します。これによりそれらの水溶性が高まり、胆汁および腎臓を介した排泄が促進されます。この酵素活性により、UGT1A8は肝臓および肝外の解毒ネットワークと結び付き、薬物代謝経路や化学的ストレスに対する細胞応答とも交差します。UGT1Aアイソフォーム内の多様性や発現変化はグルクロン酸抱合能を変動させ、代謝物クリアランスの個人差や毒性物質負荷に対する感受性の違いと関連することが示されています。そのためUGT1A8は、抱合反応の生化学的機構、代謝酵素の制御、ならびに状況依存的な細胞恒常性への影響を扱う機序研究において重要です。

UGT1A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UGT1A8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UGT1A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UGT1A8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUGT1A8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UGT1Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUGT1A8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUGT1A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUGT1A8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUGT1A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。