Plasmide CRISPR d'Activation (h) UFL1: sc-407950-ACT

UFL1 code une ligase E3 qui catalyse l’UFMylation, une voie de modification de type ubiquitine essentielle à l’homéostasie du réticulum endoplasmique (RE) et au maintien de la protéostase. En coordonnant la conjugaison d’UFM1 à des substrats spécifiques, UFL1 influence la signalisation du stress du RE, le contrôle qualité des protéines, ainsi que des voies liées à la surveillance associée aux ribosomes et à la prise en charge des protéines sécrétées. D’après la littérature, une activité altérée d’UFL1 est associée à une dérégulation des réponses cellulaires au stress et de la signalisation inflammatoire, établissant un lien mécanistique avec des phénotypes pertinents pour la maladie dans des tissus à forte demande en repliement protéique. Ainsi, UFL1 est fréquemment étudiée dans des modèles explorant l’adaptation au stress du RE, la survie cellulaire en conditions de stress protéotoxique et les interactions entre les modificateurs de type ubiquitine et la régulation de l’immunité innée.

UFL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UFL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UFL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UFL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UFL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UFL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UFL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UFL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UFL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de UFL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.