UCP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400319-ACT

UCP2（脱共役タンパク質2）はミトコンドリア内膜に存在するトランスポーターで、プロトンリークを調節することで、酸化的リン酸化の効率、ミトコンドリア膜電位、ならびに細胞内ATP産生に影響を与えます。活性酸素種（ROS）の産生やミトコンドリアのレドックス状態を調整することを通じて、UCP2はストレス応答、代謝リプログラミング、栄養状態に連動した生存シグナルに関与します。さらにUCP2の活性は、インスリン分泌、脂肪酸利用、インフラマソームシグナル、ミトコンドリア品質管理を司る経路と交差しており、代謝異常、炎症、腫瘍細胞のバイオエネルゲティクス研究において重要です。UCP2発現の異常は、複数の疾患状況における酸化ストレス応答やミトコンドリア代謝の変化と関連づけられており、ミトコンドリアおよび免疫代謝研究における機序解明の要所として位置づけられています。

UCP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UCP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UCP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UCP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUCP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UCP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUCP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUCP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUCP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUCP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。