UCP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400410-ACT

UCP1（脱共役タンパク質1）はミトコンドリア内膜に存在するプロトン輸送体であり、プロトン駆動力を散逸させることで、酸化的リン酸化をATP合成から切り離し、熱としてのエネルギー消費を増加させます。ヒトにおいてUCP1は、褐色脂肪細胞およびベージュ脂肪細胞の熱産生プログラムを特徴づける主要因子で、ミトコンドリア呼吸、脂肪酸酸化、ならびに活性酸素種（ROS）の処理に影響します。その転写制御は、アドレナリン作動性シグナル、PPAR/PGC-1α共活性化因子経路、さらに脂肪組織リモデリングを調節するより広範な代謝ストレス応答を統合する形で成り立っています。UCP1の発現や活性の変化は、肥満、インスリン抵抗性、心代謝表現型との関連でしばしば研究されており、そこで熱産生能とミトコンドリア機能は重要な変数となります。

UCP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UCP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UCP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UCP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUCP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UCP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUCP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUCP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUCP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUCP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。