UBXD7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432436

Panoramica

Ubxn7 codifica UBXD7, un adattatore contenente un dominio UBX che collega la gestione dei substrati dipendente dall’ubiquitina alla macchina ATPasica p97/VCP. UBXD7 partecipa alla proteostasi regolando il riconoscimento delle catene di ubiquitina e facilitando l’elaborazione delle proteine ubiquitinate in vie quali la degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD) e il controllo di qualità di complessi proteici bloccati o danneggiati. Attraverso queste funzioni, UBXD7 influenza le risposte cellulari allo stress, il turnover proteico e gli esiti di segnalazione legati alla dinamica del sistema ubiquitina–proteasoma. La disregolazione delle reti di proteostasi incentrate su p97/VCP è ampiamente rilevante per la neurodegenerazione e per vulnerabilità associate al cancro, rendendo Ubxn7 un nodo utile per studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBXD7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ubxn7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ubxn7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ubxn7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBXD7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ubxn7 per lo studio della segnalazione di UBXD7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ubxn7 critici per la funzione di UBXD7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ubxn7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBXD7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UBXD7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ubxn7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBXD7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UBXD7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ubxn7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ubxn7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.