UBE2D4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405030-ACT

UBE2D4は、E3リガーゼと協調して基質タンパク質にユビキチンを付加するヒトのユビキチン結合E2酵素をコードしており、タンパク質の安定性、局在、ならびにシグナル伝達の出力を制御します。ユビキチン–プロテアソーム系におけるその役割を通じて、UBE2D4は制御されたタンパク質分解（ターンオーバー）に寄与し、細胞周期の進行、DNA損傷応答、ストレス下でのプロテオスタシスに影響を与えます。ユビキチン化ネットワークの撹乱は、シグナル伝達の忠実性の変化や、ミスフォールドタンパク質／異常タンパク質の蓄積と関連しており、これらの過程はがん生物学や神経変性疾患でしばしば重要視されています。幅広いE3との適合性をもつE2因子として、UBE2D4は経路特異的なユビキチン化イベントの解析や、主要な制御ノードを担う基質の同定に有用です。

UBE2D4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UBE2D4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UBE2D4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UBE2D4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUBE2D4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UBE2D4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUBE2D4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUBE2D4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUBE2D4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUBE2D4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。