UBE1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402844

Panoramica

UBA1 codifica per l’enzima attivante del modificatore ubiquitina‑like 1 (UBE1), l’enzima E1 che avvia l’attivazione dell’ubiquitina dipendente dall’ATP e trasferisce l’ubiquitina agli enzimi coniuganti E2, sostenendo il funzionamento del sistema ubiquitina‑proteasoma. Attraverso questo punto di controllo a monte, UBE1 influenza il turnover proteico globale, la proteostasi e le risposte allo stress, incidendo su processi quali la progressione del ciclo cellulare, la segnalazione del danno al DNA e la regolazione delle vie dell’immunità innata. L’alterazione dell’attività di UBA1 può rimodellare le reti di segnalazione dipendenti dall’ubiquitina e modificare la stabilità di proteine regolatorie chiave, rendendolo rilevante per studi su neurodegenerazione, dipendenze di proteostasi associate al cancro e patologie legate al cromosoma X, inclusa l’atrofia muscolare spinale. Poiché UBE1 si colloca al vertice della ubiquitinazione, la sua perturbazione genetica offre un approccio diretto per analizzare il contributo della via dell’ubiquitina all’omeostasi cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UBA1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UBA1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UBA1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBE1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UBA1 per lo studio della segnalazione di UBE1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UBA1 critici per la funzione di UBE1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UBA1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UBE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UBA1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBE1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UBE1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UBA1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UBA1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.