UBC12 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403119-ACT

UBE2M は、E2 型ネディル化結合酵素 UBC12 をコードしており、カリュリンのネディル化を介してカリュリン-RING 型ユビキチンリガーゼ（CRL）を活性化する NEDD8 経路の中核成分です。UBC12 は CRL 活性を促進することで、細胞周期進行、DNA 複製ライセンシング、ストレス応答性シグナル伝達を制御する因子のユビキチン依存的な分解回転に影響を与え、プロテオスタシスおよびチェックポイント制御の在り方を規定します。ネディル化回路の破綻は、複数の疾患状況において増殖制御の破綻や、プロテオトキシック／ゲノトキシックストレスに対する応答の変化と関連づけられており、UBE2M はユビキチン様修飾ネットワークを研究するうえで有用な結節点となります。ヒト UBC12 の機能は、炎症性シグナルや腫瘍性の転写プログラムと交差するタンパク質恒常性経路の研究にも関連します。

UBC12 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UBE2Mの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UBC12 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UBE2M 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUBE2M転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UBC12の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUBE2M遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUBC12依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUBE2M発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUBC12経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。