U2AF35 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404986-ACT

O gene humano **U2AF1** codifica a **U2AF35**, um componente central do fator auxiliar de splicing U2, que reconhece o sítio de splicing 3′ e ajuda a recrutar o **snRNP U2** durante a montagem do espliceossoma. Ao formar parceria com **U2AF2 (U2AF65)** e ao interagir com tratos polipirimidínicos e características das junções de splicing, a U2AF35 contribui para decisões de splicing alternativo que moldam o repertório de isoformas de mRNA, a estabilidade dos transcritos e a diversidade proteica. Programas de splicing dependentes de U2AF1 interagem com o processamento de RNA, o acoplamento à transcrição e o controle do ciclo celular, tornando-o um nó-chave na regulação gênica pós-transcricional. Alterações recorrentes em U2AF1 e assinaturas de splicing desreguladas estão associadas à biologia de neoplasias hematológicas e a perturbações mais amplas na via de splicing de RNA, sustentando seu uso em estudos mecanísticos da função do espliceossoma e de mudanças de splicing relevantes para doenças.

U2AF35 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de U2AF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

U2AF35 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus U2AF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição U2AF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de U2AF35. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus U2AF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de U2AF35 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via U2AF35 em células tumorais com expressão de U2AF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.