Tyro3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401412-NIC

ヒトTYRO3は、TAMファミリーに属する受容体型チロシンキナーゼであるTyro3をコードしており、アポトーシス細胞上のホスファチジルセリンと協調することも多いリガンドGAS6およびPROS1によって活性化されます。Tyro3シグナルはPI3K–AKT、MAPK/ERK、JAK/STAT経路を作動させ、細胞の生存、増殖、遊走、およびアポトーシス由来物質の貪食クリアランスへの影響を含む自然免疫応答の抑制を制御します。神経系ではニューロンの支持やシナプス恒常性との関連が示されており、免疫の文脈では炎症の収束に寄与します。TYRO3の活性または発現の破綻は、がん性シグナルプログラム、腫瘍‐免疫相互作用の変化、ならびに炎症性疾患や神経変性疾患に関連する表現型と関連づけられています。

Tyro3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TYRO3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TYRO3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TYRO3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TYRO3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。