Tyro3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423567-ACT

Tyro3はTAMファミリーに属する受容体型チロシンキナーゼをコードしており、GAS6やProtein Sなどのリガンドに応答して、細胞の生存、増殖、ならびに細胞骨格のリモデリングを制御します。マウス組織では、TYRO3シグナルはPI3K–AKT、MAPK/ERK、JAK/STAT経路と連携し、アポトーシス細胞の貪食による除去や自然免疫の基調（トーン）の調節などの過程を形作ります。AXLおよびMERTKとのクロストークを介して、Tyro3は炎症性シグナルの恒常性維持に寄与し、多様な微小環境における細胞状態の遷移にも影響し得ます。TAM受容体活性の破綻は、免疫制御の異常や腫瘍化シグナルに関連することが報告されており、そのためTyro3は神経生物学、免疫学、がん生物学モデルにおける機序研究に有用なノードとなります。

Tyro3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Tyro3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tyro3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Tyro3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTyro3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tyro3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTyro3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTyro3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTyro3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTyro3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。