Tyro3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401412-ACT

ヒトのTYRO3は、TAMファミリーに属する受容体型チロシンキナーゼであるTyro3をコードしている。Tyro3はビタミンK依存性リガンドであるGAS6およびPROS1によって活性化され、ホスファチジルセリン結合を伴う状況下でシグナル伝達を行う。活性化後、Tyro3はPI3K–AKT、MAPK/ERK、STATなどの経路を介して細胞の生存、増殖、遊走を制御し、さらにTAMを介した負のフィードバックにより、エフェロサイトーシス（死細胞の貪食）や自然免疫応答の抑制にも寄与する。TYRO3の活性は免疫組織および神経組織における細胞恒常性に影響し、複数の腫瘍環境において炎症性シグナルの変化や腫瘍原性の表現型と関連づけられている。AXLおよびMERTKとともにTAMネットワークの一部として、Tyro3は受容体間クロストークにも関与し、サイトカイン応答、貪食によるクリアランス、組織リモデリングを形作る。

Tyro3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TYRO3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tyro3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TYRO3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTYRO3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tyro3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTYRO3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTyro3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTYRO3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTyro3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。