TUSC3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405571-ACT

TUSC3（tumor suppressor candidate 3）は、小胞体膜タンパク質をコードしており、オリゴ糖転移酵素（OST）複合体のサブユニットとして機能します。これにより、翻訳と同時に進行するN結合型糖鎖付加（N-linked glycosylation）と、新生の分泌タンパク質および膜タンパク質の品質管理を支えます。タンパク質フォールディングの恒常性維持に関わる役割を通じて、TUSC3は小胞体のプロテオスタシス、糖タンパク質の成熟、ならびに糖鎖付加状態に感受性の高い下流シグナル伝達過程（受容体の輸送やストレス適応応答など）に影響を与えます。TUSC3の発現異常や機能喪失は神経発達に関わる表現型と関連づけられており、また、糖鎖付加の破綻や小胞体ストレス経路の攪乱が増殖・接着・遊走プログラムを変化させ得る腫瘍学的文脈でも研究されています。これらの特徴により、TUSC3は、ヒト細胞モデルにおける疾患生物学に関連する糖タンパク質恒常性（グリコプロテオスタシス）、小胞体関連経路、遺伝子制御ネットワークを解析するうえで有用な結節点となります。

TUSC3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TUSC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TUSC3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TUSC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTUSC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TUSC3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTUSC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTUSC3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTUSC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTUSC3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。