TTYH1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408039-ACT

TTYH1 (membro 1 da família tweety) codifica uma proteína de membrana com múltiplas passagens, enriquecida no sistema nervoso, e implicada na regulação da homeostase iônica, da excitabilidade de membrana e da dinâmica do volume celular. O TTYH1 tem sido associado a processos como sinalização ativada por cálcio, respostas relacionadas à condução de cloreto e remodelamento do citoesqueleto, que influenciam a migração e o crescimento de neuritos. Em modelos celulares, alterações na expressão de TTYH1 podem afetar a proliferação e o comportamento invasivo, em linha com associações relatadas com a biologia do neurodesenvolvimento e com programas transcricionais relacionados a tumores cerebrais. Essas características tornam o TTYH1 um alvo relevante para o estudo de vias de sinalização associadas à membrana e de adaptação ao microambiente em células humanas.

TTYH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TTYH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TTYH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TTYH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TTYH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TTYH1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TTYH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TTYH1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TTYH1 em células tumorais com expressão de TTYH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.